DBS desorption is performed with high accuracy in the user-defined
section of the blood spot. Quantitative recovery is achieved
resulting in high reproducibility.
Schematic diagram of DBS flow-through desorption (FTD™) and SPE
cleanup. FTD is patented by, and is a registered Trade Mark of,
Spark Holland B.V.
DBS desorption is performed with high accuracy in the user-defined
section of the blood spot. Quantitative recovery is achieved
resulting in high reproducibility.

干血点自动进样器 DBSA

在血液分析中,精密度、灵敏度和所需的样本量是重要的因素,与分析时间有关。在所有这些领域,干血点(DBS)采样和分析是一个令人信服的替代方法,尤其是当使用GERSTEL多功能采样器(MPS)实现自动化时。

自20世纪60年代以来,干血点(DBS)采样一直被使用。最初,尤其是新生儿代谢紊乱筛查是基于DBS技术进行的。近年来,特别是随着更强大的GC/MS和LC/MS系统的广泛应用,DBS在药物研究[1]、法医毒理学和兴奋剂分析[2-4]以及兽医分析[5]中变得非常有用。

从指尖取几滴血就足以进行DBS分析。滴在用于数据库工作的特殊卡片上的小圆形区域上。滴干后,卡片就被用来储存和运输样品,这些样品是用专用的取样设备直接从卡片上提取出来的。

DBS样本通常含有15至30μl的血液,均匀分布在斑点上。这意味着一个有代表性的样本,以及一定数量的血液,可以通过在血点的一个小区域打孔来获取。传统上,从血斑处冲出一个直径几毫米的小而清晰的圆盘,然后转移到小瓶或微量滴定板上,在那里用合适的溶剂提取。将所得提取物离心分离,并在溶剂交换后直接清洁或分析上清液。最常见的分析技术是LC-MS/MS或GC-MS/MS。所述程序用于基于DBS卡的手动样品制备。

自动化提高生产力

为了提高吞吐量和简化常规分析工作流程,DBS技术必须适当自动化。在与Spark Holland B.V.的合作下,GERSTEL开发了一个基于Spark DBS系统的集成系统,可从多达240个DBS卡中进行全自动采样。在MAESTRO软件控制下,使用GERSTEL多功能采样器(MPS)进行自动化。该系统可作为独立工作站运行,为LC/MS分析准备样品,或与LC-MS/MS系统集成。稍微简化一下,DBS-MPS-LC-MS/MS系统*的工作原理如下:MPS将DBS卡传输到相机。一个图像识别软件评估干血点。卡被加载到解吸界面并夹紧到位。然后,解吸洗脱液流过血斑的指定区域,根据专利的流动脱附技术(FTDTM)对分析物进行解吸;如果需要,可向解吸洗脱液中添加内部标准物以达到质量目的。

洗脱液净化步骤可基于在线SPE模块进一步执行,该模块可集成到整个分析系统中。通过SPE-MS系统将样品传输至基于SPE-MS的最佳样品回收系统(SPE-MS)尽可能有效地通过SPE-MS系统进行样品回收。最后,释放卡,并用溶剂彻底冲洗相关管道。再次对卡片进行拍照,以便能够完整记录已解吸的样品区域。

结论:全自动DBSA系统能够快速、可靠地测定分析物浓度,检测限良好。

参考文献

[1] Q. C. Ji, G. Liu, C. J. D‘Arienzo, T. V. Olah, M.E. Arnold, “What is next for dried blood spots?”, Bioanalysis 4 (2012) 2059
[2] C. P. Stove, A. S. Ingels, P. M. M. De Kesel, W. E. Lambert, “Dried Blood Spots in Toxicology: from the Cradle to the Grave?”, Critical Reviews in Toxicology 42 (2012) 230
[3] L. Tretzel, A. Thomas, T. Piper, M. Hedeland, H. Geyer, W. Schänzer, M. Thevis, “Fully automated determination of nicotine and its major metabolites in whole blood by means of a DBS online-SPE LC-HRMS/ MS approach for sports drug testing”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 123 (2016) 132–140
[4] L. Tretzel, C. Görgens, H. Geyer, A. Thomas, J. Dib, S. Guddat, V. Pop, W. Schänzer, M. Thevis, “Analyses of Meldonium (Mildronate) from Blood, Dried Blood Spots (DBS), and Urine Suggest Drug Incorporation into Erythocytes”, International Journal of Sports Medicine · DOI 10.1055/s-0036, https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/pdf/10.1055/s-0036-1582317.pdf
[5] F. D. Foster, J. R. Stuff, E. A. Pfannkoch “Automated Desorption, SPE Extraction, and LC-MS/MS Analysis of Dried Blood Spots”, GERSTEL AppNote 4/2015